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实验疑难解答

实验团队凭借多年实验经验,对于实验过程中常见的问题进行归纳总结。专家团队免费解答,希望能为您带来帮助。
实验疑难解答
常见问题解答

免疫组化结果如何分析?

(1)阳性着色细胞计数法。 在40*光镜下,随机选择不重叠的10个视野,人工或机器计数阳性着色细胞,每组3~6张不同动物组织切片,然后进行组间比较即可。

(2)灰密度分析法。 通过在不同组别和不同动物组织切片上选择相同区域、相同条件下用image j进行灰密度分析,然后进行统计分析即可。

(3)评分法。 通过在光学显微镜下对组织切片分别按染色程度(0~3分为阴性着色、淡黄色、浅褐色、深褐色)、阳性范围进行评分(1~4分为0~25%、26~50%、51~75%、76~100%),最终可以分数相加,再进行比较。

对于以上这几种方法,各有利弊,请细心选择。要想得到正确结果的前提是你要做出着色均匀、背景很浅的高质量切片。

免疫荧光双标实验,需要注意哪些事项?

(1)选取一抗时要来源于两种不同的动物,用来源于rabbit和rat的抗体,二抗则是不同荧光信号标记的,比如donkey anti-rabbit-FITC(绿)和donkey anti-rat-Tex-Red(红)。

(2)两种一抗同时孵育,然后两种二抗同时孵育。抗体浓度、孵育时间要仔细摸索,感觉一抗4度孵育过夜比较好,背景比较清晰。

(3)阳性对照用的是阳性组织切片,阴性对照则分别是家兔和大鼠的IgG,荧光标记物对照是PBS+荧光标记物。

(4)封闭血清与二抗来源动物一致,用的是10%的正常donkey血清。

(5)其余步骤同一般免疫荧光单标操作

目的蛋白质分子量很小(10KD), 请问怎么做Western blo?

您可以选择0.2μml的膜,同时缩短转移时间。也可以将两张膜叠在一起,再转移。 其他按步骤即可。

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